新技術基于一種高速非侵入式光學顯微鏡,稱為SiMView光層顯微鏡,能從4個角度同時拍攝圖像,不僅能跟蹤細胞運動,還能對發(fā)展過程進行數(shù)量分析。該顯微鏡由凱勒小組和德國的歐洲分子生物實驗室合作開發(fā),攻克了傳統(tǒng)光學顯微鏡的兩個難題:一是光源對樣本造成的傷害,二是對海量數(shù)據(jù)進行處理分析。
大部分光源都會傷害細胞,使其中的熒光標記消失。研究小組設計的照明技術是一種激光掃描層,一次照射樣本極薄的一層以減少傷害,由探測儀記錄下被照亮的部分。光層來自兩個相反方向,并用兩個探測儀來探測熒光,照明與探測相結(jié)合,提供了4個不同的觀察角度。不僅能避免由于光散射而造成的模糊,還將圖像采集速度提高了50倍。
要讓照亮樣本和探測熒光在時間、位置上協(xié)調(diào)一致,時機吻合極為重要,光層交叉通過會造成圖像模糊,發(fā)光間隔僅幾毫秒。為了保持精度,SiMView還安裝了實時調(diào)節(jié)的電子系統(tǒng)。
顯微鏡每秒會收集350Mb的數(shù)據(jù),一個樣本一天要產(chǎn)生海量數(shù)據(jù),而不同條件或不同基因的發(fā)育對比實驗,所要求的數(shù)據(jù)比這還要多好多倍。為此,研究人員開發(fā)出一種新的計算方法,能識別并跟蹤顯微鏡視頻中單個細胞并自動分析。這些都構成了拍攝活樣本這一完整技術框架的必要組成部分。
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